今天解读的文章为：Overcoming tyrosine kinase inhibitor resistance in lung cancer brain metastasis with CTLA4 blockade; 于今年四月发表在Cancer cell上。此文的核心内容：如何克服肺癌脑转移对酪氨酸激酶抑制剂（TKI）的耐药性。研究团队通过CTLA4阻断策略，探索了与EGFR突变相关的肺癌脑转移的治疗新途径。以下是文章的主要要点：

研究背景：肺癌脑转移（LCBM）对TKI治疗产生耐药性是一个重大的临床挑战。

研究方法：使用单细胞RNA测序分析（scRNA-seq）研究了不同遗传背景和TKI治疗情况下的LCBM样本。

主要发现：TKI治疗增加了T细胞浸润，并通过上调CTLA4表达重新编程了T细胞的发育命运。肿瘤衍生的HMGB1激活了T细胞中的NF-kB信号通路。CTLA4阻断与TKI联合使用在EGFR突变的肺癌脑转移中具有协同效应，并可缓解获得性耐药。

研究意义：这些发现不仅提供了TKI耐药机制的见解，还强调了CTLA4阻断在有效克服LCBM中的TKI耐药潜力。

研究设计和验证：通过实验设计和两个LCBM队列的概述，研究了TKI对T细胞浸润的影响。使用小鼠模型来测试TKI在体内是否重新编程了LCBM的免疫生态系统。通过流式细胞术和IHC分析验证了TKI治疗后CTLA4+ T细胞的增加。

治疗策略：在LCBM小鼠模型中，将CTLA4阻断与TKIs联合使用，显示出比单独使用TKI或与PD1阻断抗体联合使用更强的疗效。

研究结论：CTLA4阻断与TKI联合使用可能是克服LCBM中TKI耐药性的一个有前景的治疗途径。

此文的研究思路如下：

1、LCBM患者T细胞浸润情况(scRNA+mIHC)：通过对比转移癌与原位癌、RTK突变与其他突变群体间、RTK突变者治疗前后T细胞浸润程度的差异，发现LCBM T细胞浸润高于原位癌、RTK突变存在抑制T细胞的浸润、TKI治疗RTK突变患者可增加T细胞的浸润

2、TKI治疗对T细胞亚群及功能的影响(scRNA+mIHC) ：通过对比治疗对不同T细胞亚群占比、分化轨迹、功能尤其是抑制性分子的影响，发现TKI在上调T细胞数量和杀伤功能的同时，上调CTLA4的表达

3、髓系细胞在T细胞浸润中的作用(scRNA+mIHC+体内外实验) ：通关观察不同髓系细胞亚群空间位置的差异，并对肿瘤核心部位聚集的髓系与T细胞进行受体配体分析，最后通过体内实验(动物模型加敲除髓系)、体外实验(髓系+T共培养)，明确单核细胞来源的髓系细胞在T细胞招募中起到重要作用

4、探索TKI对LCBM免疫微环境的影响(动物模型+体外验证)：构建LCBM-EGFR突变小鼠模型并TKI治疗，并检测治疗后模型中T细胞的变化，发现该模型可以模拟人LCBM，且TKI治疗EGFR突变LCBM确实可引起T细胞浸润增加，及T细胞CLTA-4表达的上调

5、TKI对巨噬细胞的影响(体内模型+体外验证)：通过研究，作者发现TKI可通过增加LCBM中HMGB1的释放，通过TLR2激活巨噬细胞中的NFkB通路，增加巨噬细胞趋化因子中多种的表达；或可通过增加LCBM中CARL的释放，促进单核来源巨噬细胞产生更多细胞因子，最终激活巨噬细胞

6、TKI对T细胞的影响(体外实验)：同样的，作者发现TKI可通过增加HMBG1的表达，通过TLR5结合T细胞，激活NFKb通路从而上调T细胞上CTLA4的表达水平

7、CTLA4抑制剂对TKI疗效的影响(体内实验)：无论在TKI敏感的EGFR突变的LCBM中，在TKI的基础上联合使用CTLA-4抑制剂，可通过增加GZMB+/CTLA4+ CD8 T细胞，改善生存的同时不增加毒性。此生存获益对KI耐受的EGFR突变的LCBM也同样适用。

8、探索CTLA4抑制剂联合TKI对免疫微环境的重塑作用(动态scRNA数据)：通过动态收集联合治疗后的样本进行scRNA分析，作者明确了联合治疗可增加T细胞与髓系细胞之间的相互作用。且在增加功能性CD8 T细胞(GZMB+)的同时，减少了抑制性(CTLA4+)CD8 T细胞的数量，起到重振T细胞的作用。